Добро пожаловать на сайт питомника

Здесь Вы найдете информацию о собаках породы: Джек Рассел терьер, Вельш Корги Пемброк, Миниатюрный бультерьер / минибуль /, Английский стаффордширский бультерьер / стаффбуль, стаффи /. Фотографии собак, щенков, выдержки из стандартов пород и множество другой информации по разведению и содержанию собак! Так же Вы сможете купить щенков этих пород в нашем питомнике ( в Москве ) недорого.





Here You will find information about kennel-klub "Star Dust" (breeds: Jack Russel Terrier, Welsh Corgi Pembroke, Mini Bull Terrier, Staffordshire Bull Terrier), photographies of dogs and puppies, endurances from standards of sorts, as well as information on tonsorial and hotel for dogs and ensemble other information on a reconnoitring and contents of dogs.

Ронколейкин.





Ответ на вопрос № 1 – к сравнительной характеристике препаратов.

Сравнительные характеристики препаратов Ронколейкин и Пролейкин определяются биологическими особенностями используемого штамма-продуцента и структурой встроенного в его генетический аппарат гена интерлейкина-2 человека.

Продуценты

Пролейкин получают на основе рекомбинантного интерлейкина-2, экспрессированного кишечной палочкой (E.coli). Остаточные количества липополисахаридного компонента клеточной стенки бактерий оказывают выраженный пирогенный эффект.

Ронколейкин получают на основе рекомбинантного интерлейкина-2, экспрессированного в непатогенных пекарских дрожжах-сахаромицетах (S.cerevisiae). Остаточные количества дрожжевых белков не токсичны, не вызывают пирогенного эффекта.

Буфер

При формулировании Пролейкина используется фосфатный буфер.

При формулировании Ронколейкина в качестве буфера используется аммоний углекислый

Структура гена

Структура гена интерлейкина-2, встроенного в генетический аппарат продуцента Пролейкина, изменена посредством методов генной инжененрии.

Структура гена интерлейкина-2, встроенного в генетический аппарат продуцента Ронколейкина, не отличается от природного.

Структура белковой молекулы

Вследствие изменения структуры гена интерлейкина-2, белковая молекула rIL-2 препарата Пролейкин отличается от нативного интерлейкина-2 отсутствием N-терминального аланина (Ala1) и заменой цистеина в положении 125 (Cys125) на серин (Ser125), т. е. является мутеином.

Молекула rIL-2 препарата Ронколейкин не отличается по структуре от нативного интерлейкина-2.

Функциональное состояние молекулы интерлейкина-2.

Пролейкин содержит окисленную форму rIL-2.

Ронколейкин содержит восстановленную форму rIL-2, которая в процессе окисления при растворении принимает конформацию нативного интерлейкина-2.

Ответ на вопрос № 2 – к токсичности препаратов.

Цитата: «Различия в клеточном субстрате могут не влиять на разную степень токсичности у препаратов».

НЕ понятно: что такое клеточный субстрат?

Если имеется ввиду штамм-продуцент, то остаточные количества липополисахаридного компонента клеточной стенки бактерий могут оказывать выраженный пирогенный эффект.

Ранее указывалось также, что существенные различия в агрегационных характеристиках нативного ИЛ-2 и его мутантного аналога в препарате Пролейкин (агрегаты до 27 молекул) могут оказывать негативное влияние на токсичность Пролейкина.

В соответствии с требованиями Минздрава во всех доклинических исследованиях дрожжевого рИЛ-2 (препарат Ронколейкин) была оценена как острая, так и хроническая

токсичность на различных видах животных с определением ЛД50 и максимально переносимой дозы препарата. Проведена оценка в динамике различных параметров, начиная от массы тела, потребления пищи и воды и кончая гистологической характеристикой различных органов и тканей.

В клинических исследованиях препарата Ронколейкин всегда регистрировались все наблюдаемые побочные эффекты (нежелательные реакции).

Ответ на вопрос № 3 – токсичность и эффективность.

Цитата: «…доклиническая токсичность с использованием моделей животных была полностью предсказана патогенезом у человека».

Прежде всего, следует заметить, что в соответствии с требованиями Минздрава РФ доклиническая часть исследований всегда предшествует клиническим исследованиям, которые соответственно подразделяются на несколько фаз, каждая из которых имеет свои цели и задачи.

Поэтому не понятно о каком предсказании и о каком патогенезе идёт речь.

Цитата: «Раз побочные эффекты отличаются, есть ли тогда разница в эффективности?!»

Нигде не доказано наличие корреляции между уровнем токсичности и уровнем эффективности.

Ответ на вопрос № 4 – к антителам.

Цитата: «Ведь даже различия в одной аминокислоте или гликозалировании может приводить к неэффективности или видовой иммуногенности с полной потерей активности».

1 – о заменах аминокислот в белковой молекуле.

Каждая замена должна рассматриваться конкретно, т.е. в каком участке молекулы она произошла. Например, некоторые изменённые формы гемоглобина действительно могут различаться по одной аминокислотной замене. Но ряд замен в других районах белковой молекулы могут не сказываться ни на биологической активности, ни на функционировании молекулы. Кстати, это подтверждает огромное число данных по нейтральной эволюции (генетическое понятие).

В настоящее время установлена правомочность замен определённых аминокислотных, которые принадлежат к одной из следующих групп. Эти аминокислоты можно заменять друг на друга, т.е. использовать для консервативной замены:

- аланин (А), пролин (Р), глицин (G), аспарагин (N), серин (S), треонин (Т);

- цистеин (С), серин (S), тирозин (Y), треонин (Т);

- валин (V), изолейцин (I), лейцин (L), метионин (М), аланин (А), фенилаланин (F);

- лизин (К), аргинин (R), гистидин (Н);

- фенилаланин (F), тирозин (Y), триптофан (W), гистидин (И); и

- аспарагиновая кислота (D), глутаминовая кислота (Е).

Это, кстати, использовано при генетической инженерии молекулы Алдеслейкина (Пролейкина), где цистеин в положении 125 заменён на серин. Биологическая активность молекулы сохранилась.

2 – теперь о гликозилировании

Процесс гликозилирования происходит на стадии посттрансляционной модификации белковой молекулы и необходим для секреции молекулы (т.е. выхода из клетки). Гликозилирование не влияет на уровень биологической активности, при этом размер этого углеводного остатка может варьировать. Предполагают также, что гликозилирование имеет значение для растворимости.

Если задача генетической инженерии состоит в создании секреторных форм белковых молекул, то они должны нести дополнительно углеводный компонент, т.е. гликозилированы.

Молекула нативного интерлейкина-2 гликозилирована по ОН-группе Thr3, в препаратах Ронколейкин и Пролейкин ИЛ-2 не гликолизирован, содержится только пептидный компонент.

Цитата: «Развиваются ли при введении Ронколейкина антитела у животных к ИЛ-2 человека?»

Специальных исследований на эту тему не проводили. Однако литературные данные по применению гетерологичных белковых препаратов указывают, что нейтрализующие антитела могут образовываться лишь при постоянном и длительном применении.

Известно, что гомологичные белки разных видов обычно имеют полипептидные цепи, идентичные или почти идентичные по длине. Более того, в аминокислотных последовательностях гомологичных белков во многих положениях всегда находятся одни и те же аминокислоты - их называют инвариантными остатками. Вместе с тем в других положениях таких белков наблюдаются значительные различия: в этих положениях аминокислоты варьируют от вида к виду; такие аминокислотные остатки называются вариабельными. Всю совокупность сходных черт в аминокислотных последовательностях гомологичных белков объединяют в понятие гомология последовательностей; наличие такой гомологии предполагает, что животные, из которых были выделены гомологичные белки, имеют общее эволюционное происхождение. Причём, аминокислотные последовательности, наиболее важные для функционирования молекулы, формируют инвариантные области, т.е. одинаковые аминокислотные остатки.

Сравнительное изучение иммунной системы у животных разных видов показало, что она принадлежит к числу наиболее консервативных и древнейших систем организма. Для различных представителей позвоночных, начиная с костистых и хрящевых рыб, характерен высокий уровень гомологии её организации и функционирования. В частности, везде сохраняется функциональная роль интерлейкина-2 как ростового фактора Т-лимфоцитов, усиливающего их пролиферацию. Сравнительный анализ аминокислотной последовательности интерлейкина-2 показал значительное сходство его первичной структуры у различных млекопитающих и человека (до 80%). Выявлена высокая гомология и в расположении консервативных участков молекулы ИЛ-2.

В связи с этим необходимо также заметить, что принятый международный тест определения биологической активности препаратов интерлейкина-2 подразумевает использование культуры клеток CTLL-2, имеющих мышиное происхождение.

Также общеизвестно, что используемые в настоящее время иммунотерапевтические препараты тактивин, тималин имеют животное происхождение и являются пептидами тимуса животных.

Ответ на вопрос № 5 – экзотические животные.

Случаев применения Ронколейкина для лечения некоторых экзотических животных немного:

Цитата: «Метаболизм Ронколейкина у теплокровных животных и у рептилий одинаковый?»

Обмен веществ животных складывается из двух тесно связанных друг с другом процессов ассимиляции и диссимиляции.

Ассимиляция, или анаболизм, процесс усвоения организмом питательных веществ, поступающих из внешней среды. Питательные вещества ассимилируются и становятся белками, жирами и углеводами, присущими данному организму, его строительными материалами и энергетическими ресурсами. Эти сложные биохимические преобразования и превращения совершаются при участии многочисленных ферментов.

Диссимиляция, или катаболизм, - процесс распада сложных органических веществ, сопровождающийся освобождением большого количества энергии. Процессы ассимиляции и диссимиляции, тесно переплетаясь друг с другом, способствуют постоянному обновлению состава организма, что, конечно, требует и энергетического обеспечения.

Обмен аминокислот. После всасывания в кровь и частично в лимфу аминокислоты в организме животного претерпевают ряд превращений. Во-первых, происходит синтез белков, направленных на восполнение физиологических затрат белка в результате жизнедеятельности организма.

В обмене аминокислот наибольшее значение имеют реакции дезаминирования, трансаминирования и декарбоксилирования.

В результате дезаминирования аминокислот и распада других азотистых соединений в тканях непрерывно образуются аммиак, двуокись углерода и вода. Аммиак токсичен для животных, поэтому его накопление привело бы к неизбежному отравлению организма. Однако у высших животных аммиак в органах и тканях не накапливается, а за счет существующих ферментативных механизмов он обезвреживается и переходит в мочевину.

Мочевина - это главный конечный продукт азотистого обмена, выделяющийся с мочой у млекопитающих животных. У птиц и рептилий основной конечный продукт азотистого обмена представлен мочевой кислотой. Конечными продуктами азотистого обмена, кроме мочевины и мочевой кислоты, являются креатин и гиппуровая кислота.

Ответ на вопрос № 6 – профилактическое применение

Инструкции по применению Ронколейкина у человека и животных могут различаться. В этом нет ничего удивительного.

Инструкция по применению Ронколейкина у человека подготовлена в соответствии с Международной статистической классификацией болезней и проблем, связанных со здоровьем – МКБ-10. Этот документ не применяется в ветеринарии.

У людей Ронколейкин используется с целью профилактики инфекционных послеоперационных осложнений, что документировано и доказано с высоким уровнем достоверности.

В доклинических исследования показано, что Ронколейкин достоверно повышает выносливость животных к физическим нагрузкам. Это может служить основанием для его профилактического применении у животных в соревновательный период или при стрессовых ситуациях, поскольку как большим физическим нагрузкам, так и стрессовым ситуациям сопутствует транзиторный иммунодефицит. Это досконально изучено при круглогодичном наблюдении за спортсменами. Соответственно это может наблюдаться и у животных.

Цитата: «Ронколейкин – это вакцина?»

Вакцина – это препарат, содержащий убитые или ослабленные возбудители различных заболеваний либо синтезированные белки патогенных микроорганизмов. Их вводят в организм человека для создания иммунитета к определённой болезни. В ответ на введение вакцины появляются антитела против того или иного возбудителя.

Ронколейкин – не вакцина, механизм его действия не зависит от природы конкретного возбудителя, но основан на взаимодействии с иммунными клетками.

Ответ на вопрос № 7 – к комплексной терапии

Цитата: «По каким конечным точкам препарат изучался, в комбинации с антибиотиками?!»

Не ясно: что такое конечные точки?

Что же касается схем применения Ронколейкина, то он при различных нозологиях применяется в составе комплексной терапии, в том числе, и с антибиотиками.

Ответ на вопрос № 8 – про «брата»

Все предыдущие ответы с достаточной ясностью охарактеризовали в сравнительном аспекте препараты Пролейкин и Ронколейкин. Её раз необходимо подчеркнуть, что это два разных препарата, которые имеют свои ниши применения.

Также следует отметить, что МНН не может служить единственным ориентиром для заключения о терапевтической эквивалентности препаратов, так как они могут различаться по лекарственной форме (Ронколейкин – раствор, Пролейкин – лиофизилизированный порошок), дозировке (имеются различия), способам применения (имеются различия) и т. д., о чём шла речь выше. (Письмо Минэкономразвития России, Минздравсоцразвития России и Федеральной автономной службы РФ от 31.10.2007 №16811-АП/Д04, 8035-ВС и /ИА/20555.)

Специалисты FDA (Food fnd drug administration, USA) не считают препараты терапевтически эквивалентными, если имеются химические модификации действующих веществ, которые преследуют цели изменения растворимости, стабильности, кристалличности, размеров частиц, биодоступности и др., что, в конечном счёте, влияет на безопасность и эффективность.

Исходя из этого, можно заключить, что молекула интерлейкина-2 подверглась значительной химической модификации, что существенно повлияло на профиль её безопасности (см. нежелательные реакции применения Пролейкина). Такого рода модификации молекулы интерлейкина-2 в препарате Ронколейкин отсутствуют, что указывает на иной профиль его безопасности.

Сравнительная характеристика двух препаратов рекомбинантного интерлейкина-2 человека – Пролейкина и Ронколейкина

Анализируемая характеристика

Ронколейкин

Пролейкин

1. Штамм-продуцент

Рекомбинантный штамм дрожжей Saccharomyces cerevisiae

Рекомбинантный штамм бактерии Escherichia coli 2. Состав препарата - рекомбинантный интерлейкин-2 – 1 мг - додецилсульфат натрия (ДСН) - 10 мг* - D-маннит – 50 мг - дитиотреитол (ДТТ) – 0,08 мг (на ампулу)** - аммоний углекислый – 0,79 мг *Вводимая с препаратом доза ДСН в 1500 раз ниже токсической. ** Вводимая с препаратом доза ДТТ в 70 000 раз ниже токсической. - рекомбинантный интерлейкин-2 – 1 мг - додецилсульфат натрия (ДСН) – 0,20-023 мг - D-маннит – 50 мг - компоненты фосфатного буфера – 1,06 мг (0,17 мг + 0,89 мг) 3. Молекулярная масса rIL-2 (15300+200) Да Около 15600 Да 4. Молекулярная структура rIL-2 Не гликолизирован. Является полным структурным аналогом белкового компонента эндогенного IL-2. Не гликолизирован. Является мутеином: - отсутствует N-терминальный аланин, - цистеин в положении 125 (Cys125) заменён на серин (Ser125). 5. Агрегационное состояние rIL-2 Не образует агрегатов. Возможно образование небольшого количества димеров (не более 2%) c молекулярной массой 26 000-30 000 Да. Отличается от агрегационного состояния эндогенного IL-2: при растворении образует микроагрегаты, включающие, в среднем, 27 молекул rIL-2. 6. Исходное функциональное состояние rIL-2 Восстановленная форма rIL-2 Окисленная форма rIL-2. 7. Биологическая активность Остаточная удельная биологическая активность восстановленной формы rIL-2 составляет 1 млн. МЕ/мг. При переходе молекулы rIL-2 в окисленную форму (при растворении) биологическая активность возрастает до 12 млн. МЕ/мг Удельная биологическая активность – 16,3 млн. МЕ/мг 8. Правила приготовления инфузионного раствора Для внутривенного введения препарат из ампулы переносят в 400 мл изотонического раствора натрия хлорида для инъекций. Применения 5% раствора глюкозы способствует потере активности субстанции. Для приготовления инфузионного раствора содержимое флакона растворяют в 1,2 мл воды для инъекций, затем приготовленный раствор разводят в 500 мл 5% раствора глюкозы с добавлением 0,1% человеческого альбумина. Применения 0,9% раствора натрия хлорида способствует агрегации субстанции. 9. Побочные эффекты Опыт применения Ронколейкина® свидетельствует о его хорошей переносимости. При введении Ронколейкина в отдельных случаях возможно появление кратковременного озноба и повышение температуры тела (гриппоподобный синдром), что купируется обычными терапевтическими средствами. Сердечно-сосудистая система: артериальная гипотензия или гипертония, аритмии, тахикардия, одышка, приступы стенокардии, инфаркт миокарда. ЖКТ, печень: тошнота, рвота, дисфагия, анорексия, диспепсия, гастрит, нарушения функции печени, гипербилирубинемия, повышение уровня печёночных трансаминаз и щелочных фосфатаз в крови. ЦНС, психика: тревога, беспокойство, сонливость, депрессия, галлюцинации, головокружение, парастезии, синкопе, нарушение речи, судороги. Система кроветворения: тромбоцитопения, лейкопения, нарушение коагуляции. Опорно-двигательный аппарат: артралгии, миалгии. Обмен веществ: гипергликемия, гипокальцемия, гиперкалиемия, увеличение массы тела. Аллергические реакции: эритема, кожная сыпь, конъюнктивит. Мочевыделительная система: олигурия, повышение концентрации мочевины и креатинина в сыворотке, редко - гематурия. Прочее: лихорадка, асцит, флебит. 10. Показания к применению Хирургия: сепсис, перитонит, панкреатит, остеомиелит, ранения и травмы, ожоги, абсцессы и флегмоны, диабетическая стопа, коррекция вторичного иммунодефицита после оперативных вмешательств. Внутренние болезни: пневмония, бронхиальная астма, язвенная болезнь, пиелонефрит. Фтизиатрия: туберкулез. Инфекционные болезни: ВИЧ-инфекция, гепатит С, герпетическая инфекция, ГЛПС, псевдотуберкулёз, бруцеллез, рожистое воспаление, боррелиоз, клещевой энцефалит, менингит, энцефалит. Дерматовенерология: хламидиоз, микоплазмоз, хронический простатит, фурункулёз, упорные пиодермии, атопический дерматит, сифилис. Гинекология: эндометрит, эндометриоз, вторичное бесплодие. Неврология: рассеянный склероз. Кардиология: инфекционный эндокардит. Оториноларингология: гнойный синусит, отит. Онкология: почечно-клеточный рак, рак мочевого пузыря, колоректальный рак, меланома, увеальная меланома, глиобластома, метастатический плеврит, а также предупреждение возникновения и коррекция лимфопении при оперативном вмешательстве и проведении лучевой и химиотерапии. Онкология: метастатическая почечно-клеточная карцинома, метастатическая меланома, злокачественные заболевания крови. Инфекционные болезни: ВИЧ-инфекция.

Наибольшее значение для клиницистов при использовании препаратов рекомбинантного интерлейкина-2 имеет величина его удельной активности - биологической активности, отнесённой к единице массы (МЕ/мг). Последняя, в свою очередь, всецело зависит от третичной структуры, которую молекула интерлейкина-2 приобретает спонтанно при растворении лиофилизированного порошка rIL-2.

В полипептидной цепи IL-2 имеются три цистеиновых остатка в положении 58, 105 и 125 (Cys58, Cys105 и Cys125 соответственно). В результате взаимодействия – SH-групп указанных цистеиновых остатков возможно образование различных внутримолекулярных и межмолекулярных дисульфидных –S-S– связей. Наибольшей биологической активностью обладает молекула IL-2, имеющая дисульфидную связь Cys58/Cys105 и свободную сульфгидрильную группу Cys125.

Восстановленная форма rIL-2 имеет полный набор сульфгидрильных групп –SH, характеризуется высокой гидрофобностью, биологически не активна и поддерживается высокой концентрацией ДСН (додецил сульфат натрия) в растворе.

Приобретение молекулой rIL-2 биологической активности наблюдается при понижении ДСН в растворе и сопровождается её переходом в окисленное состояние, что определяется образованием дисульфидной связи –S-S– между цистеиновыми остатками Cys58 и Cys105.

Определение биологической активности препаратов rIL-2 предполагает использование международного стандартного теста с культурой IL-2-зависимых опухолеспецифических цитотоксических Т-лимфоцитов мыши линии CTLL-2. Биологически активный rIL-2 стимулирует пролиферацию этих клеток. При этом в качестве растворителя используется 0,1% раствор ДСН.

В настоящее время известно несколько коммерческих препаратов рекомбинантного интерлейкина-2, получаемых на основе экспрессии гена IL-2 человека в клетках микроорганизмов. Продуцентами Пролейкина (Альдеслейкина) / Cetus, США; Chiron, Европа/ и rIL-2 фирмы Hoffmann LaRoche /Франция/ являются штаммы кишечной палочки E. coli, и эти препараты содержат в качестве активного начала окисленный rIL-2. В указанные инъекционные лекарственные композициии ДСН добавляют для повышения растворимости rIL-2. Добавка ДСН к окисленному rIL-2 в Пролейкине составляет 0,20-0,23 мг на 1 мг белка.

Ронколейкин® получают на основе экспрессии гена IL-2 в штаммах дрожжей Saccharomyces cerevisiae, и выделяемый rIL-2 находится в восстановленной форме, благодаря использованию высокой концентрации ДСН (10 мг на 1 мг белка; вводимая с препаратом доза ДСН в 1500 раз ниже токсической). При разведении препарата происходит снижение концентрации ДСН, и создаются условия для перехода молекулы rIL-2 из восстановленной формы в биологически активную окисленную форму.

Частично это достигается при разведении Ронколейкина® 0,1% ДСН в ходе определения биологической активности в стандартном тесте с культурой линии CTLL-2. В этом случае его удельная активность составляет (1 200 000 ± 400 000) МЕ/мг. Более значительное снижение концентрации ДСН наблюдается при разведении содержимого ампулы Ронколейкина® в 400 мл 0,9% NaCl (объем капельницы).

Эти условия являются наиболее оптимальными для проявления активности rIL-2: удельная активность Ронколейкина® возрастает в 10 раз и становится равной 12 000 000 МЕ/мг.

Указанные различия в проявлении биологической активности учитывать при расчёте дозировок препарата Ронколейкин®, когда за основу берутся лечебные схемы, разработанные для Пролейкина.

Ампула Пролейкина, содержащая 1,1 мг rIL-2, обладает биологической активностью 18 000 000 МЕ.

Соответственно ампула Ронколейкина®, содержащая 1,0 мг rIL-2, достигает в физиологическом растворе биологической активности 12 000 000 МЕ.

В связи с этим коэффициент пересчёта доз Ронколейкина® к дозам Пролейкина равен 1,5.

Сравнительная характеристика двух препаратов рекомбинантного интерлейкина-2 человека – Пролейкина и Ронколейкина



Скачать DOC>>

Автор:Систряк Зоя
Источник: https://vk.com/lzhenaukenet










Телефон: (8-925) 272-65-44
(8-916) 564-58-75
Copyright 2008. Питомник « Звёздная Пыль »